細菌內毒素檢測在醫療器械和注射藥物的安全評估中占據核心地位，特別是針對革蘭氏陰性細菌釋放的高熱原性內毒素。傳統上，這一檢測依賴于天然鱟試劑LAL，但近年來，隨著對可持續性和性能優化的追求，重組級聯試劑（rCR）PyroSmart NextGen®逐漸嶄露頭角，成為備受矚目的替代選擇。

一、背景與目的

PyroSmart NextGen®重組鱟試劑是一種基于鱟基因克隆技術開發的重組級聯試劑（rCR），旨在提升對特定內毒素的反應性，并減少外部干擾。

本研究旨在全面評估PyroSmart NextGen®重組鱟試劑與LAL試劑在細菌內毒素檢測中的等效性，并驗證其在平板讀數器和試管讀數器方法中的性能表現。

二、分析性能驗證

根據ICH Q2指南和USP<1225>標準，對PyroSmart NextGen®重組鱟試劑在試管讀數器中的性能進行了全面評估，結果顯示其在準確度、精確度、特異性、定量限（確定為0.001EU/mL，試劑靈敏度相較于平板讀數器檢測法提高了5倍）、線性和范圍等關鍵參數上均符合驗收標準（表1）。

這些分析測試結果進一步證實了PyroSmart NextGen®重組鱟試劑作為LAL試劑替代品的分析性能和適用性。

三、等效性測試驗證

采用平板讀數器和試管讀數器方法，使用PyroSmart NextGen®重組鱟試劑和兩種LAL試劑對100多個過濾水樣進行等效性測試。通過相對回收率、線性回歸分析和Bland-Altman圖等方法，評估兩種試劑之間的等效性。

●相對回收率：在測試的102個樣本中，91%的平板讀數器樣品和80%的試管讀數器樣品的相對回收率結果在50–200%之間（圖1），符合美國藥典最大試劑變異率的標準。

●線性回歸分析：對平板讀數器與試管讀數器檢測的樣品分別進行線性回歸比較后，發現平板讀數器的線性回歸斜率為0.9873，95%置信區間為0.8779至1.097；而試管讀數器的斜率為1.073，置信區間為0.9769至1.170。

兩個讀數器的斜率均在0.7至1.3的范圍內（圖2），進一步證實了PyroSmart NextGen®重組鱟試劑與LAL試劑在檢測水樣內毒素方面的等效性。

●Bland-Altman圖：在圖3所示的Bland-Altman圖中，平板讀數器檢測的偏差為-21.43，試管讀數器的偏差為-64.58，但兩者均有97%的數據點落在95%的一致性上限和下限（LOA）范圍內。

根據證明等效性的標準，即至少95%的數據點應位于此區間內，PyroSmart NextGen®重組鱟試劑與LAL試劑在平板讀數器和試管讀數器方法上的比較均達到了等效性的要求。

四、替代試劑開發與實施的關鍵考量因素

本研究還強調了替代試劑在開發和實施過程中需要考慮的關鍵因素，如產品質量、風險管理、生產質量管理體系等。這些因素對于確保替代試劑的可靠性、穩定性和可持續性至關重要。

五、結論

PyroSmart NextGen®重組鱟試劑作為一種重組級聯試劑（rCR），在細菌內毒素檢測中表現出與LAL試劑相當的檢測性能。其靈敏度更高，且能與多種LAL試劑進行等效分析。

這些結果充分證明了PyroSmart NextGen®重組鱟試劑符合美國藥典通用通告和要求6.30以及美國食品藥品監督管理局工業指南對替代檢測方法的要求，是替代LAL試劑的理想選擇。